体外下拉试验（In vitro pull-down assay）又称蛋白质下拉实验，主要用于研究蛋白质与蛋白质、蛋白质与核酸或其他生物分子之间的相互作用。在体外下拉试验中，通常将感兴趣的蛋白质（称为“诱饵”）固定在固相载体上，如琼脂糖珠或磁珠，然后将含有可能与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白质（称为“靶”）的溶液加入反应体系中。通过洗涤和分离，未结合的蛋白质被去除，而结合的靶蛋白则被“拉下”并固定在固相载体上。后续通过电泳和质谱等分析手段，可以鉴定出与诱饵蛋白相互作用的靶蛋白。体外下拉试验通过模拟细胞内复杂的生物环境，帮助科学家揭示分子间的相互作用机制，从而为理解生命过程提供信息。体外下拉试验的应用非常广泛。其不仅可用于确认已知的蛋白质相互作用，还可以用于发现新的相互作用网络。此外，体外下拉试验还可以帮助研究蛋白质复合物的组成，从而揭示复杂生物功能的分子基础。例如，在信号传导研究中，体外下拉试验可用于鉴定参与特定信号通路的组成分子，从而为靶向治疗提供线索。

一、体外下拉试验分析步骤

1、准备：获取高纯度的目标蛋白，可通过原核或真核表达系统进行重组表达、纯化；选择合适的亲和标签（常见的有 GST、His 标签等）标记目标蛋白，准备对应的固相载体；制备细胞裂解液，其含有丰富的细胞内源性蛋白质，作为潜在相互作用蛋白的来源。

2、固定目标蛋白：将带有亲和标签的目标蛋白与固相载体孵育，使二者特异性结合，从而将目标蛋白固定在载体表面。例如，GST 融合蛋白与 GST 亲和树脂结合，形成固定化的 “诱饵”。

3、孵育与结合：把固定有目标蛋白的固相载体放入细胞裂解液中，在适宜的温度（常为 4℃）、时长（数小时至过夜）条件下缓慢摇动孵育，促进可能存在的相互作用蛋白与目标蛋白结合。

4、洗涤：孵育结束后，使用缓冲液多次洗涤固相载体，目的是洗去未与目标蛋白结合的杂蛋白，减少背景干扰，这一步骤对结果的特异性至关重要。

5、洗脱：运用合适的洗脱试剂（如含游离亲和标签的溶液、高盐缓冲液、改变 pH 的缓冲液等）将结合在目标蛋白上的相互作用蛋白从固相载体上洗脱下来。

6、检测：采用 Western blot、SDS - PAGE 电泳、质谱分析等手段对洗脱下来的蛋白进行鉴定和分析。

二、注意事项与常见问题

1、非特异性结合：为了减少非特异性结合，通常需要在反应体系中加入高盐、非离子型洗涤剂等，以提高结合反应的特异性。

2、蛋白质的稳定性：反应条件（如pH、温度）需要优化，以保证蛋白质的稳定性和活性，避免错误的相互作用结果。

3、信号强度：在检测阶段，确保检测方法的灵敏度足够高，以便正确识别低丰度的靶蛋白。

三、技术优势

1、高特异性与灵敏度：通过优化反应条件和检测方法，体外下拉试验可以实现对特定分子间相互作用的高特异性检测。

2、广泛的适用性：无论是蛋白质、核酸，还是其他生物大分子，体外下拉试验都能适应不同的分子类型。

3、实用性强：实验操作相对简单且结果直观，适合大规模筛选和验证。

体外下拉试验凭借其优势，在蛋白质组学、药物靶点发现、信号通路解析等众多生物学研究领域，都是极为关键的研究手段。采用ISO9001质量控制体系，获国家CNAS实验室认可，百泰派克生物科技致力于提供专业的Pull-down靶蛋白质谱鉴定服务，能够根据客户的研究需求设计和执行定制化的实验方案。无论是基础研究还是应用开发，我们都致力于为您提供高质量的实验数据和科学支持，帮助您的研究项目取得成功。欢迎与我们合作。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

>>点击了解更多优质服务项目