「DIFF  CRO」登革真病毒中和抗体检测

「DIFF  CRO」提供基于荧光斑点计数法的中和抗体检测服务（图1），该检测方法灵敏度高、检测迅速，并且该实验方法的特异性、重复性均能满足中和实验的要求，适用于高通量样本的检测。

图1. 登革真病毒中和抗体检测流程图

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服务内容

针对登革病毒的蛋白酶抑制剂筛选

新型登革热病毒蛋白酶抑制剂的发现对于抗登革热药物研发至关重要，在大量化合物中寻找DENV蛋白酶抑制剂的过程中，行业急需一种可实现无需活病毒参与的细胞水平的正向筛选方式。由「DIFF  CRO」开发的蛋白酶抑制剂筛选系统，可在细胞水平直接模拟病毒自然感染过程，杜绝漏筛和假阳性等情况，可在新药发现阶段快速筛选大量化合物。

1）最简便

肉眼观测

DIFF蛋白酶抑制剂筛选系统可通过肉眼直接观察药物反应的荧光变化（图2），进行定性判断。

图2. 以新冠阳性药物GC376为例，添加不同浓度新冠3CL蛋白酶抑制剂后，

24h,48h,72h细胞GFP表达情况如上图所示

2）最准确

原理可靠

本系统基于特制质粒的共表达机制，以新冠病毒为例，结合重组绿色荧光蛋白（rGFP）和冠状病毒3CL蛋白酶。在该系统中，rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特异性切割位点。当3CL蛋白酶功能正常时，会特异性裂解rGFP，导致其荧光功能丧失，荧光强度减弱。相反，当抑制剂有效抑制了3CL蛋白酶的活性时，rGFP无法被切割，维持其完整性并正常发出荧光，荧光强度增强（图3）。药物有效性与荧光强度成正相关，是一种更直观的正向筛选方式。

图3. DIFF蛋白酶抑制剂筛选系统原理图

结果准确

系统实验结果与真病毒检测结果高度一致（图4）。

图4. 使用活病毒进行检测，GC376的IC50值为4.69μM；而采用DIFF筛选系统，IC50值为6.44μM，两种方法测得的IC50值高度相近。

图5. 添加不同浓度新冠蛋白酶抑制剂72h后荧光检测值

3）可进行高通量筛选

系统检测的荧光值低而信噪比好，可联合现有药物库，一周迪福即可筛选1万-10万个登革热药物候选化合物，快速锁定有效药物（图6）。

图6. 高通量筛选操作示意图