精品│翌圣ZymeEditor打造超高文库转化率T4 DNA Ligase
建库作为NGS测序的核心步骤，直接影响测序质量，文库转化率是评估文库质量的重要指标，高的文库转化率一定程度上意味着文库丰富度、测序数据均一性更好。常规T4 DNA Ligase催化DNA的 3’-OH 和接头的5’-磷酸基团之间形成磷酸二酯键完成接头连接，但此过程中会出现片段自连，从而减低文库转化率，影响文库丰富度与测序质量。翌圣ZymeEditor™酶改造平台对T4 DNA Ligase进行定向改造获得Hieff® 5' App T4 DNA Ligase（Cat#14960ES），该突变体只能以预苷化接头为底物进行接头连接，显著减少片段自连，提高文库转化率。
图1. NGS常规建库流程
产品特点
1、极低片段自连：只能以预腺苷化的接头为底物，极大降低片段自连。
2、超高接头连接效率：连接效率达95%以上。
3、严格质控：无切口酶、外切酶及RNase残留。
数据展示
图2. 以170 bp模式片段为底物连接效率检测
图3. 以300 bp模式片段为底物连接效率检测
图4. RNase残留检测 C：阴性对照
3、无切口酶及外切酶残留
将200 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase与底物DNA孵育，琼脂糖凝胶电泳比较DNA谱带变化。结果显示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase无切口酶残留。
图5. 切口酶残留检测 C：阴性对照
将2000 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase与底物DNA孵育，琼脂糖凝胶电泳比较DNA谱带变化。结果显示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase无外切酶残留。
图6. 外切酶残留检测 C：阴性对照
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产品定位 |
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UCF.ME® T4 DNA Polymerase (3 U/μL) |
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T4 Polynucleotide kinase(10 U/μL) |
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常规接头连接 |
Hieff® Quick T4 DNA Ligase |
10301ES |
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预腺苷化接头连接 |
Hieff® 5' App T4 DNA ligase |
14960ES |
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文库扩增 |
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