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Benzonase核酸酶,是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性,又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中核酸的污染,且无蛋白酶活性残留,核酸酶活性达1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时, 也具有多种其他用途,如:减少了样品处理时间,增加了蛋白产量,离心时时沉淀和上清分离的更彻底,更便于溶液的离心(尤其是超滤);提高色谱纯化的效率等。 本公司Benzonase核酸酶包括四种,分别为不含任何标签的Benzonase核酸酶(科研级别)、无内毒素Benzonase核酸酶、Strep tagII Benzonase核酸酶(科研级别)和无内毒素的Strep tagII Benzonase核酸酶,可适应不同下游用途的需求。其中Strep tagII Benzonase核酸酶可在消化完核酸后通过Strep Tactin XT Resin高效去除,而无内毒素的两种Benzonase核酸酶,内毒素含量<40EU/mL(按照单位换算量计算为,每1000U中含有的内毒素<0.15EU),可适用于药用级别的研发和生产。另外,核酸酶残留可通过我公司开发的荧光探针的Benzonase核酸酶残留检测试剂盒进行评测,15min即可完成检测,最低可检测到2ng/ml的核酸酶残留。
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用量推荐 |
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单位定义 |
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37℃,pH 8.0反应条件下,在30分钟内使△A260 值降低1.0(相当于完全消化37 μg DNA )的酶量定义为一个活性单位。 注意:含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。 |
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应用 |
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储存 |
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置于-20°C,可保存2年。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
实例分析 |
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Fig1. 分别取不同量(0、0.125、0.25、0.5、1、5、10U)的Benzonase核酸酶消化人基因组DNA10min,进行琼脂糖电泳。 | Fig2. A为未加Benzonase处理的,B为加Benzonase处理的 样品进行二维电泳。如图所示,Benzonase处理的样品可显 著增加二维电泳的分辨率。 |
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Fig3.经RIPA裂解未经Benzonase核酸酶处理的样品, 大量基因组DNA释放出来,呈鼻涕状。 |
Fig4.离心后,左管为未加Bezonase核酸酶,有鼻涕状 粘稠物质悬浮在管中,右管为加Bezonase核酸酶,上 清为透明液体。 |
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超强兼容性 |
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全能核酸酶在非常广泛的条件下,都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性,这使其能够与多种细胞裂解液,如RIPA,或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如:>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA会使活性丧失90%,1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。 浓度<0.4%的Triton® X-100对核酸酶活性几乎无影响,<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性,超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低,1%的浓度会使活性丧失70%;0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响,而SDS浓度在0.1%-1%之间时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外,核酸酶可耐受6M尿素,当尿素达到7M时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,亦可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Benzonase的去除 |
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对于Strep-tag II标签的Benzonase核酸酶(C2003,C2004)可通过Strep Tactin XT Resin直接 去除,去除率>95%;对于不带标签的Benzonase核酸酶(C2001,C2002),可通过色谱纯化去除核酸酶,然后可通过检测残留活性或ELISA检测来判断去除是否成功。常见的色谱纯化方式有阳离子交换介质和阴离子交换介质,具体的Benzonase去除条件如下表: | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Benzonase 核酸酶(科研级)说明书
作者:上海信裕生物科技有限公司 2021-05-18T00:00 (访问量:2590)
Benzonase 核酸酶(科研级)